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主办单位:内蒙古自治区食品药品学会
编辑出版:北方药学编辑部
刊期:月刊
国内定价:每期12元 ,全年144元
创刊时间:2004年
国内统一刊号:CN15-1333/R
国际标准刊号:ISSN1672-8351
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药品质量与检验
 
高效液相色谱法测定保济丸中葛根素和柚皮苷的含量 2018/10/23
   


高效液相色谱法测定保济丸中葛根素和柚皮苷的含量
赵士冶(湖南省药品检验研究院  长沙  410001)
摘要:目的:建立高效液相色谱法测定保济丸中葛根素和柚皮苷含量,并对10批样品进行测定。方法:采用DIKMA Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-1%冰醋酸溶液梯度洗脱;流速:1.0mL•min-1;检测波长:278nm;柱温:30℃。结果:葛根素的线性范围为0.0484~0.725μg,线性方程为Y = 81630X -21274(r=0.9998);平均回收率为98.9%(n=6),RSD为1.1%;柚皮苷的线性范围为0.0326~0.489μg;线性方程为Y =56136X-11030(r=0.9999),平均回收率为99.5%(n=6),RSD为1.2%。结论:该法简便、准确、重复性好,适用于同时测定保济丸中葛根素和柚皮苷含量。
关键词:高效液相色谱法  保济丸  葛根素  柚皮苷

Determination of puerarin and baringin in baoji pills by HPLC
Zhao Shiye(Hunan Institute for Drug Control, Changsha 410001)
Abstract: Objective: The content of puerarin and naringin in Baoji pills was determined by high performance liquid chromatography(HPLC),and samples were studied. Methods: The separation was performed with a DIKMA Diamonsil C18 column(4.6mm×250mm,5μm) and the mobile phase was acetonitrile-1% glaeial acetic acid aqueous solution gradient elution. The flow rate was 1.0mL•min-1 and the wavelength of detection was 278nm. The column temperature was 30℃. Results:   The liner range of puerarin was 0.0484~0.725μg. The linear regression equation was Y = 81630X-21274(r=0.9998). The average recovery was 98.9%(n =6,RSD=1.1%). The liner range of naringin was 0.0326~0.489µg. The linear regression equation was Y=56136X-11030(r=0.9999). The average recovery rate was 99.5%(n=6,RSD =1.2%). Conclusion: This method is simple, accurate, good reproducibility and can be used to simultaneously determine the content of puerarin and naringin.
Key words: HPLC baoji pills  puerarin  naringin
保济丸是由菊花、厚朴、木香、葛根、化橘红等15味中药材加神曲制备而成,用于暑湿感冒,症见发热头痛、肠胃不适等;亦可用于晕车晕船,是广东及东南亚华人家庭常备药品之一。《中国药典》2015年版一部中检测厚朴酚与和厚朴酚的含量[1]。葛根及化橘红在保济丸中具有抗炎、镇痛重要作用[2],葛根素与柚皮苷是中药葛根及化橘红中起药理作用的指标性成分,在保济丸中含量均较高[3,4],最大吸收波长接近,便于同时测定。作者建立梯度洗脱法同时测定保济丸中葛根素及柚皮苷的含量,能更全面控制该制剂质量,提高检验效率;并用该法测定10批样品,以便了解不同厂家该制剂中两种成分含量。
1 仪器与试药
LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津);AG135天平(梅特勒-托利多);葛根素、柚皮苷(均购自中国食品药品检定研究院,批号分别为110752-201514、110722-201111,含量分别为95.5%、93.2%);乙腈(色谱纯)、冰醋酸(优级纯)。
保济丸:Ⅰ~Ⅳ、广东省罗浮山白鹤制药厂,批号:150815,1601002,1604010,1604009;Ⅴ~Ⅵ、国药集团冯了性(佛山)药业有限公司,批号:160006,150055;Ⅶ~Ⅹ、广州王老吉药业股份有限公司,批号1508021,1603001,1603014,1602011。规格均为3.7 g/瓶(袋)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件:DIKMA Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250mm,5µm);柱温:30℃;检测波长:278nm;进样量:10µL;流速:1.0mL•min-1;流动相:乙腈(A)-1%冰醋酸溶液(B),梯度洗脱:0~20min,5%→18%A,20~35min,18%→28%A,35~40min,28%→35%A。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液:称取葛根素、柚皮苷对照品15.82、10.93mg,分别置25mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,得对照品贮备液;分别精密量取对照品贮备液各2mL,置25mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,即得。
2.2.2 供试品溶液:取本品10瓶(袋),粉碎成细粉,精密称取约0.8g,精密加入50%甲醇50mL,称定重量,超声处理(功率400W,频率50 kHz)30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,即得。
2.2.3 阴性溶液:称取处方中不含葛根及化橘红的其他药味,按照制备工艺制成阴性样品,依照“2.2.2”法处理得阴性溶液。
2.3 方法学考察 
2.3.1 专属性试验:取对照品溶液、供试品溶液和阴性溶液,按“2.1”项下的色谱条件测定。葛根素与柚皮苷出峰时间分别为18.9min、32.0min,两者分离良好,阴性溶液在相同保留时间处无干扰。结果见图1。
 
图1  A-阴性样品;B-对照品;C-供试品;1-葛根素;2-柚皮苷。
2.3.2 线性关系及范围:取配制的对照品溶液1、2、5、10 、15µL进样并记录峰面积,考察峰面积(Y)与实际进样量(X)线性关系,结果表明葛根素在0.0484~0.725µg范围内线性关系良好,线性方程为Y = 81630 X - 21274(r =0.9998);柚皮苷在0.0326~0.489µg范围内线性关系良好,线性方程为Y=56136X-11030(r =0.9999)。
2.3.3 精密度:取对照品溶液在“2. 1”项下色谱条件下进样6次,记录峰面积,葛根素与柚皮苷峰面积的RSD%分别为0.78%、0.83%。
2.3.4 稳定性:取同一供试品溶液于0、4、8、12、24、48h进样,记录峰面积,葛根素与柚皮苷峰面积RSD%分别为1.2%、1.1%,表明供试品溶液放置48h内稳定。
2.3.5 重复性:按“2.2.2”项下配制6份样品Ⅰ溶液,进样,记录色谱图并计算含量,葛根素与柚皮苷平均含量分别为2.18mg/g、0.86mg/袋,RSD%分别为0.9%、1.3%。
2.3.6 加样回收率:精密称取已知含量的样品Ⅰ粉末约0.4 g,称取6份,每份均加入葛根素对照品贮备液1.5mL与柚皮苷对照品贮备液1.0mL,按“2.2.2”项下处理进样。记录峰面积并计算两种组分含量与回收率,葛根素平均回收率(n=6)为98.9%,RSD为1.1%;柚皮苷平均回收率(n=6)为99.5%,RSD为1.2%。
2.3.7 样品含量测定:取编号为Ⅰ~Ⅹ样品,按“2.2.2”项下制备并进样。记录峰面积并计算葛根素与柚皮苷含量,测定结果见表1。
表1  样品测定结果(mg/g , n=3)
 
样品 含量(mg/g) 样品 含量(mg/g)   
 葛根素 柚皮苷  葛根素 柚皮苷   
Ⅰ 2.18 0.86 Ⅵ 3.06 3.35   
Ⅱ 2.05 0.56 Ⅶ 2.8 2.16   
Ⅲ 2.33 0.48 Ⅷ 3.22 2.79   
Ⅳ 2.23 0.43 Ⅸ 3.16 2.67   
Ⅴ 2.95 1.95 Ⅹ 3.02 2.06 
3 讨论
3.1 提取溶剂及提取时间选择:本实验考察不同浓度甲醇、不同浓度乙醇作为提取溶剂,结果表明50%甲醇中测定成分提取最完全,其他成分干扰较少;超声30 min后,测定成分溶出完全,因此选用50%甲醇超声30min为提取条件。
3.2 梯度洗脱方法的选择:保济丸在50%甲醇提取液中成分多且与葛根素极性接近的成分多[5],本实验通过多次调整洗脱时间及比例,找到适合的梯度方法,使测定成分与样品中其他组分完全分离,且峰形对称,适合测定。
3.3 测定波长选择:葛根素最大吸收波长为252nm、306nm,柚皮苷最大吸收波长为230nm、278nm、310nm[5],经多次实验选择在278nm下测定,柚皮苷为最大吸收,同时葛根素吸收较强,两种成分灵敏度均高。
3.4 测定结果:对不同厂家不同批号10批样品进行测定,结果表明同一厂家样品两种测定成分含量比较接近;不同厂家葛根素含量测定结果比较接近,柚皮苷含量测定结果有一定差异,可能与不同厂家生产工艺不同有关。
参考文献
 
[1] 中国药典2015年版.一部[S].北京:中国医药科技出版社,2015:1261.   
[2] 李润萍,朱盛山,邬威尧,等.保济丸中化学成分与药理作用研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(11):200-203.   
[3] 冼健民,黄志豪.HPLC法测定保济丸(浓缩丸)中柚皮苷的含量[J].国际医药卫生导报,2008,14(16):85-88.   
[4] 黄澜,陈惠玲,黄惠琼,等.保济丸HPLC指纹图谱研究[J].海峡药学,2013,25(12):113-115.   
[5] 王祥红,谢培山,田润涛,等.复方中成药保济丸的HPLC—DAD指纹图谱研究[J].中国中药杂志,2007,32(17):1748-1751. 


 

 
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